细菌的正常生长需要多种营养物质,在细菌生长、伸长及分裂的全过程中,约有40-50%的细胞壁组分被回收以用于产生这些营养物质。在营养缺乏的情况下,细菌对细胞壁回收过程更为依赖。在大肠杆菌这一革兰氏阴性菌中,细胞壁的回收过程十分复杂,需要多种酶协同参与。在细胞壁组分N-乙酰胞壁酸(MurNAc)的代谢通路中,转录抑制蛋白MurR调控通道蛋白MurP及酯酶MurQ的表达,但这一通路的分子机制及影响因素仍不明确。
先前研究表明,在大肠杆菌的细胞壁回收过程中,通道蛋白MurP将细胞外的细胞壁碎片N-乙酰胞壁酸(MurNAc)转运至细胞内,生成N-乙酰胞壁酸-6-磷酸(MurNAc-6-P)。随后,酯酶MurQ对MurNAc-6-P进行切割,生成D-乳酸和N-乙酰葡糖胺-6-磷酸(GlcNAc-6-P),参与中心代谢及新的细胞壁合成。
作为RpiR/AlsR家族中的一种转录调控因子,MurR在代谢细胞壁回收产物中具有重要作用。在营养缺乏的条件下,MurR的缺失更利于细菌的生长。MurR蛋白具有两个结构域,一个结合DNA,一个结合信号分子。MurR特异性结合其启动子DNA序列后会形成MurR/DNA复合物。
研究人员发现,MurR与两种细胞壁代谢产物MurNAc-6-P、GlcNAc-6-P都存在较强的结合能力。但信号分子MurNAc-6-P对MurR/DNA复合物的解离作用更为明显。
进一步对比MurR裸蛋白及MurR/ MurNAc-6-P、MurR/ GlcNAc-6-P复合物的晶体结构可发现,两套复合物结构的整体构象几乎一致,而裸蛋白与复合物中MurR的结构则存在明显差异,这一结构变化可能有利于配体与蛋白更好地结合。研究进一步发现,MurR与信号分子间形成了三种作用力。相比之下,MurR与MurNAc-6-P的相互作用更为紧密。研究还验证了参与氢键相互作用的氨基酸在MurR调控基因表达过程中的关键作用。本工作为后续研究RpiR/AlsR家族蛋白提供了性质与结构等方面的重要信息。
图2:MurR/ MurNAc-6-P、MurR/ GlcNAc-6-P复合物结构中的具体相互作用